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雞透明質酸檢測試劑盒的使用步驟和方法

發布時間: 2022-11-12  點擊次數: 77次
  雞透明質酸檢測試劑盒的使用步驟和方法:
  一、樣品DNA的制備
  用自選方法提取待測樣品的總DNA。注意:待測樣品的DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
  二、制備TB基因標準曲線
 ?。ㄒ?0-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或雞透明質酸檢測試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
  1.標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
  2.用帶芯槍頭分別加入45μL超純水(建議用帶芯槍頭,下同)。
  3.先將雞透明質酸檢測試劑盒提供的陽性對照用超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將雞透明質酸檢測試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍剃度稀釋,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
  4.在6號管中加入5μL10E7拷貝/μL的TB陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的TB陽性對照。
  5.換槍頭,從6號管中取5μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的TB陽性對照。
  6.換槍頭,從5號管中取5μL溶液到4號管中,得10E4拷貝/μL的TB陽性對照。
  7.重復上面的操作直到得到從10E6拷貝/μL到10E1拷貝/μL6個稀釋度的TB陽性對照。
  8.NC管中不加任何陽性對照。
  9.從1-6號管中分別取5μL和待測樣品一起進行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCRCt值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線。
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