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小鼠瘦素檢測試劑盒的操作流程是什么

發布時間: 2022-07-07  點擊次數: 200次
 
  小鼠瘦素檢測試劑盒是用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗該指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗該指標抗體、HRP標記的親和素,經過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
 
  小鼠瘦素檢測試劑盒的操作流程:
 
  (1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
 
  (2)酶標板置4℃,包被過夜。
 
  (3)洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
 
  (4)陰性對照孔每孔加入PBS50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
 
  (5)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
 
  (6)洗板,同(4)。
 
  (7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液100μl。
 
  (8)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
 
  (9)洗板,同(4)。
 
  (10)每孔加TMB顯色液100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
 
  (11)每孔加100μl2mol/LH2SO4終止反應。
 
  (12)分別測450nm吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
 
  (13)數據處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
 
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